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ELISA試劑盒診斷牛副結(jié)核病的實(shí)驗方法
更新時間:2013-12-25   點(diǎn)擊次數(shù):1233次

一、ELISA試劑盒診斷牛副結(jié)核病的操作方法

1、血清處理 取待檢血清、參考陽性血清、參考陰性血清各0.10ml,加生理鹽水0.80ml,加草分枝桿菌吸收抗原0.10ml,混勻,37℃感作1h.取0.10ml,ELISA試劑盒加血清稀釋液0.90ml(注意血清稀釋液中加牛血清白蛋白,不加犢牛血清)?;靹蚣纯?br>2、抗原包被 以抗原稀釋液將副結(jié)核親和層析抗原稀釋至50µg/ml,每孔包被0.1ml.部分對照孔以牛血清白蛋白(50µg/ml)包被。
3、正式試驗 按表12-4進(jìn)行。每個樣品加2孔,以求OD平均值。
二、ELISA試劑盒診斷牛副結(jié)核病的材料與試劑
1、牛副結(jié)核病參考陰性血清
2、草分枝桿菌吸收抗原
3、兔抗牛IgG酶標(biāo)抗體
4、牛副結(jié)核病參考陽性血清
5、試劑及溶液配制同第五節(jié)豬瘟ELISA。
1~5項均由單位供應(yīng)。
6、器材ELISA板,酶聯(lián)免疫吸附檢測儀、加樣器、洗瓶、恒溫箱等。
7、副結(jié)核分枝桿菌親和層析抗原
三、ELISA試劑盒診斷牛副結(jié)核病的結(jié)果判定
在對照組成立的前提下, 即參考陽性血清呈棕,參考陰性血清及其它對照孔呈無色或淺, 判定待測結(jié)果。
1、酶標(biāo)儀判定(490nm) 以底物溶液對照孔調(diào)零,校正參考陽性血清OD值為1.0(或相應(yīng)規(guī)定值),測定待檢孔。當(dāng)OD≥0.50,判ELISA陽性(+);0.40≤OD≤0.49判ELISA可凝(±);OD<0.40,判ELISA陰性(-)。
2、目測判定 與參考陽性血清孔顏色相當(dāng),即呈棕,判為ELISA陽性(+)。

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