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酶聯(lián)免疫試劑盒中的HRP和OPD之迷
更新時間:2013-08-02   點擊次數(shù):3140次

   酶聯(lián)免疫試劑盒的底物A就是顯色劑A(含過氧化氫)為供氫體(DH2),底物B就是顯色劑B(含TMB),用于顯色。        
  另外,常用的底物還有:
1)AP的底物,常用的為對-硝基苯磷酸脂(PNP),其反應(yīng)物為的對硝基酚,測讀波長為405nm2)GOD的底物,為葡萄糖,供氫體為對硝基藍四氮唑,反應(yīng)產(chǎn)物為不溶性的藍色沉淀         什么是TMB?TMB即四甲基聯(lián)苯胺(3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine)是一種脂溶性較強的基團,因此容易進入細胞與細胞器中的HRP反應(yīng),且由于這種高度的脂溶性,使其易形成多聚體,在HRP活性部位產(chǎn)生粗大的、深蘭色沉淀物,這使得TMB成為組化實驗中的一種很好的發(fā)色團。同時反應(yīng)產(chǎn)物的沉淀,使得HRP的活性部位更加暴露,利于酶氧化反應(yīng)進行。
   酶聯(lián)免疫試劑盒TMB的反應(yīng)產(chǎn)物為深藍色,利于光鏡觀察,且反應(yīng)產(chǎn)物越聚越大,常超出單個細胞器的范圍(而DAB則被限制在其內(nèi)),故TMB反應(yīng)的檢測閾較低。
   由于上述優(yōu)點,目前TMB常用于光鏡及超微結(jié)構(gòu)水平的HRP及HRP-WGA神經(jīng)投射的研究。
   需要注意的是:TMB顯色液中的A液和B液應(yīng)在2h內(nèi)新鮮配制。另外,TMB是一種較強的皮膚刺激劑,并有致癌的潛在可能,故使用時應(yīng)帶手套及在通風條件下操作。
   TMB經(jīng)HRP作用后共產(chǎn)物顯藍色,目視對比鮮明。TMB性質(zhì)較穩(wěn)定,可配成溶液試劑,只需與H2O2溶液混和即成應(yīng)用液,可直接作底物使用。另外,TMB又有無致癌性等優(yōu)點,因此在ELISA中應(yīng)用日趨廣泛。酶反應(yīng)用HCL或H2SO4終止后,TMB產(chǎn)物由藍色呈,可在比色計中定量,zui適吸收波長為405nm。
   ABTS雖不如OPD和TMB敏感,但空白值極低,也為一些酶聯(lián)免疫試劑盒所采用。

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